植物总RNA提取试剂盒(离心柱法)

产品货号：

SN0003

中文名称：

植物总RNA提取试剂盒(离心柱法)

英文名称：

ColPure Plant Total RNA Extraction Kit

产品规格：

50T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

本制品适合于从50～100mg植物组织中快速提取总RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，整个提取过程只需30～40min。试剂盒采用膜过滤及DNase I消化，可更高效地去除基因组DNA，提取的总RNA纯度高，基本没有蛋白和其他杂质的污染，可直接用于RT-PCR、Northern Blot、Poly A纯化，核酸保护和体外翻译等实验。

产品特点：

安全低毒：无需酚、氯仿等有毒试剂；
操作简便：30～40min内完成数个样品的总RNA提取；
高效去除基因组DNA：采用膜过滤及DNase I消化，高效去除基因组DNA；
RNA纯度高：提取的RNA无杂质残留，适用于对纯度、完整性要求很高的下游实验。

适用范围：
本制品适用于各种普通植物组织样品的总RNA提取。

产品组成：

组分	规格
裂解液GRL	30mL
去蛋白液GRW1	40mL
漂洗液GRW2	12mL
RNase-Free双蒸水	15mL
RNase-Free DNase I	100μL
DNase Buffer	1.5mL
RNase-Free ColPure gDNA清除柱	50套
RNase-Free ColPure RNA吸附柱	50套

保存：室温，其中DNase及其Buffer需置于-20℃，有效期1年。

注意事项：

第一次使用前应在漂洗液GRW2中加入48mL的无水乙醇。
操作前在裂解液Buffer GRL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1mL GRL中加入10μL β-巯基乙醇。此裂解液现配现用，加过β-巯基乙醇的GRL置于2～8℃可保存一个月。裂解液GRL在储存时可能会形成沉淀，若有沉淀出现，请加热溶解后使用。
DNase I工作液的配制：2μL DNase I ＋ 28μL DNase Buffer，轻轻吹打混匀，现用现配。
由于植物样品种类的多样性，且同一植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料用量。
使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染，经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及RNase等，可能导致RNA降解。
RNA在裂解液GRL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗、灭菌。
以下操作均在室温下进行。

使用方法：

样品处理：取50～100mg植物组织样品，使用液氮将样品充分研磨至粉末状，立即加入450μL Buffer GRL（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），高速涡旋震荡混匀。
可选步骤：若取样量过多或者上述裂解液较粘稠，可减去部分吸头末端，若仍不好吸取，可在步骤2前先将样品于12000rpm(~13400×g)离心2min，取上清再进行步骤2过滤。
将所有溶液转移至过滤柱RNase-Free ColPure gDNA清除柱中，12000rpm(~13400×g)离心2～5min，小心吸取收集管中的上清至RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
加入0.5倍滤液体积无水乙醇（通常为225μL），用移液枪吸打3～5次充分混匀（此时可能会出现沉淀），将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱RNase-Free ColPure RNA吸附柱中，12000rpm(~13400×g)离心30～60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
如果滤液体积有损失，请相应调整乙醇的加量。
向吸附柱中加入350μL去蛋白液GRW1，12000rpm(~13400×g)离心30～60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
DNase I工作液配制：2μL DNase I ＋ 28μL DNase Buffer，轻轻吹打混匀。
向吸附柱中央加入30μL的DNase I工作液，室温放置15min。
向吸附柱中加入350μL去蛋白液GRW1，12000rpm(~13400×g)离心30～60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL漂洗液GRW2（使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2min，12000rpm(~13400×g)离心30～60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
重复步骤8。
12000rpm(~13400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱置于室温开盖放置数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的RT等实验。
将吸附柱放入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30～100μL RNase-Free双蒸水，室温放置2min，12000rpm(~13400×g)离心2min，得到RNA溶液，将洗脱的RNA置于-80℃保存。
洗脱液体积过小影响回收效率，柱子最小的洗脱体积是30μL。

常见问题：

过滤柱出现堵塞？
- 样品用量过多。按照说明书推荐的要求适量取样；
- 若裂解液较粘稠，不好吸取，可在步骤2前先将样品于12000rpm(~13400×g)离心2min，取上清再进行步骤2过滤；
- 样品富含多糖多酚类物质。处理富含多糖多酚的组织，推荐使用专用试剂盒提取；
- 离心温度过低。本制品使用操作均在室温下进行。
提取的RNA出现降解？
- 样品用量过多。影响裂解液的裂解能力，造成RNase未被充分抑制，导致RNA降解，建议参考说明书推荐取样量，若要增加样品起始量，则后续实验中各溶液量均要按等比例增加。对于内源RNase含量较多的组织应减少样品量，适当增加裂解液用量；
- 样品保存不当。反复解冻会引起RNA降解，尽量使用新鲜样品或者解冻次数不超过2次的样品；
- 操作过程中引入RNase污染。请使用RNase-Free的工具、试剂和耗材；
- 电泳过程中发生降解。使用RNase-Free的Loading Buffer、琼脂糖和电泳缓冲液等。
RNA得率低？
- 样品用量过多。样品过量会影响裂解效果，建议按照说明书要求适量取样；
- 样品裂解不充分。请按照说明书的要求进行充分研磨、裂解；
- 洗脱不充分。RNase-Free双蒸水需直接加到膜中央，并静置2min后再离心，必要时可进行二次洗脱以提高产量；
- 吸附柱有乙醇残留。使用Buffer GRW2漂洗后需要开盖晾干吸附柱中的乙醇。
提取的RNA中有DNA污染？
- 样品用量过多。超出试剂盒规定的样本量影响裂解液的裂解能力可能会导致基因组的污染；
- 次生代谢物较多。次生代谢物含量高的样本在提取RNA时易出现基因组的污染；
- 操作过程中需要进行去除基因组DNA的操作，若DNA含量较多，可延长DNase I消化时间或重复消化。

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